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杀菌冰箱抗菌防霉检测方法的研究

丁年平 杨冠东张增峰 黄春喜 郑飞龙 杨永强

(广州工业微生物检测中心 广州  510663)

摘要:本实验对冰箱抗菌防霉检测方法进行了研究。结果表明,在冰箱杀菌检测,由于冰箱低温低湿的环境,以常规的玻片为载体时,对照冰箱中大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌的自然消亡率高,作用24h达到99.9%,而以琼脂片为载体,由于琼脂片本身具有一定的水分,自然消亡率较低,琼脂片是冰箱杀菌检测中一种较合适的染菌载体;防霉检测中,除了需要对试验空间进行喷雾加湿,还应该定期对培养基表面加湿,才能保证培养基和霉菌所需的水分,对照冰箱中霉菌正常生长。

关键词:冰箱;抗菌家电;臭氧;杀菌;抗菌防霉检测

1.前言

家用电器的抗菌、除菌、净化等卫生功能作为一项附加功能,虽出现时间不长,但已为消费者所了解,并受到青睐[1]。现有的冰箱除菌标准,主要是关于冰箱部件及材料的抗菌防霉检测方法,而对于利用臭氧、紫外、负离子的杀菌冰箱的抗菌防霉检测方法研究较少,也没有相应的标准,目前对于这方面的检测主要依据《消毒技术规范》卫生部2002年版-2.1.5灭菌与消毒器械消毒功效鉴定试验[2]。但由于冰箱特殊的低温低湿环境,依照此方法进行检测时,若作用时间较短,对杀菌效果影响较小[3],但作用时间较长时,主要出现了如下问题:若以传统染菌载体,玻片、滤纸片、棉布等,部分检测菌种的自然消亡率较高,杀菌率结果计算存在差异或难以计算;防霉检测中,培养基容易失水,对照冰箱霉菌不生长等。

本文通过试验,研究了以玻片及琼脂片为载体,臭氧杀菌冰箱对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、白色葡萄球菌的杀菌效果检测的影响;防霉检测中,对冰箱试验空间以及培养基表面进行喷雾加湿对试验结果的影响。

2.试验设备与材料

2.1试验设备

压力蒸汽灭菌器;恒温培养箱;天平,精确度± 0.01 g;三角烧瓶,配盖;移液管;酒精灯;接种环;培养皿;冰箱; O3测定仪。

2.2试剂、 培养基、缓冲液

营养琼脂、磷酸盐缓冲液(PBS)、YPD、PDA、改良察氏液体培养基(北京陆桥有限公司)

2.3菌种

抗菌检测:大肠杆菌 ATCC 25922、金黄色葡萄球菌ATCC6538、白色念珠菌ATCC 10231、绿脓杆菌ATCC15442、白色葡萄球菌8032

防霉检测:黑曲霉AS3.4463、绳状青霉AS33875、球毛壳霉AS34254、出芽短梗霉AS33984、土曲霉 AS33935、宛氏拟青霉 AS3.4253

3.试验方法

3.1抗菌检测方法的研究

3.1.1臭氧浓度检测

打开冰箱及臭氧发生器,将冰箱冷藏室温度设定在4℃。一天后,冰箱冷藏室达到4℃,检测臭氧浓度。

3.1.2 菌种活化

将标准菌株接种于营养琼脂斜面上,在(37±1)℃培养24h后,在5℃~10℃下保藏(不得超过一个月),作为斜面保藏菌。将斜面保藏菌转接到平板营养琼脂培养基,在(37±1)℃培养(24±1)h,每天转接1次,不超过2周。试验时应采用3代~14代,24h内转接的新鲜细菌培养物。

3.1.2 菌液的制备

用接种环从3.1.2新鲜培养物上刮1环新鲜细菌,加入培养液中,并依次做10倍梯度稀释至所需要的浓度(约1×108cfu/mL~5×108cfu/mL)。取菌液10ul滴加到载体(10mm×10mm,玻璃片、琼脂片)上,将染菌载片置于37℃温箱内干燥30min后再放置在平板中(每块菌片的回收菌数,按活菌培养计数所得结果,应为5×105cfu/片~5×106cfu/片),备用。

3.1.3在以下三种条件下进行试验,试验重复三次,每次三个平行,取平均值做检测结果:①在室温条件下(30℃培养箱),不接臭氧发生器(A);②冰箱冷藏室在4℃条件下,不接臭氧发生器(B);③冰箱冷藏室在4℃条件下,接臭氧发生器,臭氧浓度设定为0.05ppm(C)。

3.1.4将染菌载片放置于3.1.3三种条件下,检测经过4h,12h,24h后,载片上菌落数的变化。

3.2防霉检测方法的研究

3.2.1 菌种活化

将保藏菌接种在PDA斜面培养基试管中,培养7d~14d,使生成大量孢子。未制备孢子悬液时,不得拔去棉塞,每打开1支只供制备1次悬液,每次制备孢子悬液必须使用新培养的霉菌孢子。

3.2.2 将孢子悬液喷洒在改良察氏培养基表面,将其放置在3.1.3三种条件下,观察不加湿、试验空间喷雾加湿的情况下,培养基情况及霉菌生长情况。

3.3结果计算及评定

3.3.1杀菌率计算

杀菌率的计算依据《消毒技术规范》卫生部2002年版-2.1.5灭菌与消毒器械消毒功效鉴定试验。

自然消亡率=[(A-B)/A]×100%;杀菌率=[ (B-C)/B]×100%;

3.3.2防霉结果评定[4]

GB 21551.4-2010家用和类似用途电器的抗菌、除菌、净化功能 电冰箱的特殊要求标准规定,对照样品长霉面积应不小于10%,否则不能作为该试验的对照样品。

4.结果与分析

4.1冰箱抗菌检测方法的研究

  

                                    (a)大肠杆菌                                            (b)金黄色葡萄球菌

 

 

                                 (c)白色念珠菌                                           (d)绿脓杆菌


                             (e)白色葡萄球菌

     

                          (f)自然消亡率                                                        (g)杀菌率

图1 不同载片对冰箱杀菌检测方法的影响(A:常温对照,B:对照冰箱,C:杀菌冰箱,自然消亡率=[(A-B)/A]×100%,杀菌率=[ (B-C)/B]×100%)

由图1(a)- (g)可才看出,在冰箱杀菌检测中,以常规的玻片为载体,作用4h时,对照冰箱中的大肠杆菌、白色念珠菌、绿脓杆菌自然消亡率均达到70%以上,12h时,自然消亡率达到99%左右,24h时,自然消亡率达到99.9%;而金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌的自然消亡率较小。以琼脂片为载体时,对照冰箱中大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、白色葡萄球菌的自然消亡率均比较小,作用24h后,消亡率均在50%以下。这是因为,冰箱内部是一个低温低湿的环境,以玻片为载体时,大部分微生物由于缺水,自然消亡率高,而部分微生物,如金黄色葡萄球菌对低温低湿的耐受性较强,在干燥环境中,依然可以存活数周,自然消亡率就比较低;以琼脂片为载体时,虽然冰箱内部环境湿度较低,但是琼脂片本身具有一定的水分,为微生物存活提供了需要的水分,自然消亡率就比较低。

在冰箱杀菌检测中,若对照冰箱的自然消亡率较高,对最后杀菌率D的计算有很大的影响。如以玻片为载体时,大肠杆菌、白色念珠菌、绿脓杆菌12h的杀菌率小于4h 的杀菌率,而24h的杀菌率由于对照冰箱的消亡率太高而无法计算。因此,冰箱杀菌检测中,选择合适的载体尤为重要。试验结果说明,琼脂片是冰箱杀菌检测中一种较合适的染菌载体。

4.2冰箱防霉检测方法的研究

表1冰箱防霉检测中不同条件下培养基及霉菌生长情况

试验

条件

防霉

检测

培养基情况

霉菌生长情况

不加湿

  A(培养箱)

试验期间培养基未失水变薄

试验期间霉菌正常生长,

覆盖至整个培养基表面

B(对照冰箱)

试验第二天培养基开始失水变薄

直至干枯

试验期间霉菌未生长

C(杀菌冰箱)

试验第二天培养基开始失水变薄

直至干枯

试验期间霉菌未生长

试验空间喷雾加湿

A(培养箱)

试验期间培养基未失水变薄

试验期间霉菌正常生长,

覆盖至整个培养基表面

B(对照冰箱)

试验期间培养基轻微失水

试验期间霉菌正常生长,

覆盖至整个培养基表面

C(杀菌冰箱)

试验期间培养基轻微失水

试验期间霉菌未生长

冰箱湿度一般是40%-70%[5],而在运行时,如没有加湿装置,一般只能达到40%左右。由表1可以看出,冰箱防霉中,若不加湿,培养基从试验第二天开始便会失水变薄,对照冰箱和杀菌冰箱中的霉菌均不生长。而依据相关标准,对照样品长霉面积应不小于10%,否则不能作为该试验的对照样品。如果对冰箱试验空间进行喷雾加湿,培养基能较好保持水分,对照冰箱中的霉菌亦能正常生长。但是试验中亦发现,由于冰箱的制冷功能,制冷后,冰箱内的部分水分变成了冰,冰箱不断制冷,虽然进行喷雾加湿,但是湿度保持亦比较难,因此,试验时,除了需要对试验空间进行喷雾加湿,还应该定期对培养基表面加湿。

5.结论

试验表明,由于冰箱的制冷功效,冰箱内部为一个低温低湿的环境,在冰箱的杀菌检测中,若以玻片为载体,对照冰箱中大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌的自然消亡率高,作用24h达到99.9%,杀菌率结果差异较大或无法计算,而以琼脂片为载体,由于琼脂片本身具有一定的水分,自然消亡率较低,对杀菌率的计算无影响,因此,琼脂片是冰箱杀菌检测中一种较合适的染菌载体。在防霉检测中,除了需要对试验空间进行喷雾加湿,还应该定期对培养基表面加湿,才能保证培养基和霉菌所需的水分,对照冰箱中霉菌正常生长。

在冰箱的实际使用过程中,一般用来保藏果蔬等食品,因此,建议在检测冰箱杀菌性能的时候,除了用特定的染菌载体,也可以考虑用果蔬等实物表面做载体进行检测,这样更具有代表性。

参考文献

[1]李毕忠,李泽国.家用电器的抗菌除菌净化功能标准对抗菌剂企业发展的影响[J].新材料产业2010,1:43-45

[2]卫生部卫生法制与监督司. 消毒技术规范[ S ]. 北京: 中华人民共和国卫生部, 2002: 20 - 23.

[3]丁年平,黄春喜,周卓为等. 臭氧发生器应用于冰箱的杀菌效果研究[J].家电科技2012,7

[4]GB 21551.4-2010家用和类似用途电器的抗菌、除菌、净化功能 电冰箱的特殊要求

[5]焦岩,张岩,李保国等.湿湿度变化对冰箱中果蔬贮藏质量影响的研究[J].低温与特气,2001,19(6):18-21

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